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臺式MALDI-TOF定量檢測羊絨與羊毛

發布時間:2020-04-23 閱讀次數:44次

導語

說起MALDI-TOF(基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜)很多人都不陌生,通過“軟電離”方式與飛行時間質譜的結合,可以快速檢測多肽、多糖、蛋白、聚合物、脂類等各種天然或合成有機分子的分子量,檢測成本低、前處理簡單、分析通量高、結果準確,廣泛應用于研究開發以及質控管理等各類。


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臺式MALDI-8020外觀

 

 

MALDI- 8020體積小巧,配備355 nm 200Hz固態激光器,支持離子源自清洗,軟件界面友好,適合實驗室的常規定性及定量檢測。

 

2018年,國際標準化組織(ISO)發布了利用MALDI-TOF MS檢測特征性多肽來進行紡織品中動物毛發纖維定性和定量分析的方法(ISO 20418-2: 2018),利用羊絨、羊毛蛋白酶解產物中角蛋白特征多肽峰的相對信號強度比值可以直接換算出羊絨、羊毛含量的比值。這種方法相比傳統的顯微觀察法,更加客觀準確、分析通量更高,同時也彌補了熒光定量PCR檢測DNA受損傷的樣品結果不準確的缺陷。下面我們來看下應用臺式MALDI-TOF(MALDI-8020)檢測羊絨含量的具體的操作方法及結果。

 

表1. 羊絨與羊毛物種特異性I型角蛋白多肽位點

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注:*代表C上發生烷基化修飾;紅色字母代表特征位點。

 

將羊絨、羊毛標準品按照一定比例混合,提取蛋白并酶解后,取酶解產物進行質譜檢測,質譜圖見圖1。

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圖1. 羊絨羊毛混合標準品酶解產物一級質譜圖

 

 

根據不同比例羊絨與羊毛混合標準品中的羊絨特征峰的相對信號強度的平均值與羊絨含量(%)建立校準曲線,結果見下圖。

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圖2. 羊絨、羊毛混合物中羊絨含量的校準曲線

 

根據建立的校準曲線,測試經權威檢測部門驗證過的實際樣品,樣品羊絨含量標注值及實測值統計結果見表2所示。由結果可知,實際樣品檢測結果與標注值一致,表明該方法可以用于羊絨制品中羊絨含量的檢測。

 

表2. 羊絨制品實際樣品檢測結果


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當然,MALDI-TOF不止可以定量檢測羊絨、羊毛混合品中的羊絨含量,還可以利用其優秀穩定的定量能力應用于臨床檢測與疾病的診斷、食品的摻假鑒別、基礎科學研究等領域,隨著研究人員的努力,MALDI-TOF的定量性能將在更多領域內大放異彩。

 

 

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